buy brand viagra
Oligonukleotydy są dostarczane w liofilizowanej formie. Tuż przed użyciem oligonukleotydy powinny być zawieszone w roztworze wodnym.
Przygotowanie oligonukleotydów:
- przed otwarciem probówki z oligonukleotydami po raz pierwszy, należy przeprowadzić krótki spin – pellet powinien znajdować się na dnie probówki;
- oligonukleotydy w postaci dostarczonej przez firmę (nierozpuszczone) są stabilne w temperaturze pokojowej lub 4°C, natomiast dłuższe przechowywanie oligonukleotydów powinno odbywać się w temperaturze -20°C, aby inaktywować nukleazy;
- do rozcieńczania oligonukleotydów zaleca się stosowanie sterylnej wody o obojętnym pH (pH 7,0) lub buforu TE (10mM Tris pH 8.0; 0.1mM EDTA; pH 8.0). Użycie wody o pH poniżej 7,0 prowadzi do depurynacji, w celu zwiększenia pH można zastosować NaOH;
- dla zachowania stabilności DNA/RNA wymagane jest środowisko wolne od nukleaz;
- Cy5-modyfikowane oligonukleotydy są niestabilne w środowisku zasadowym.
- Oligonukleotydy należy podzielić na mniejsze porcje;
- Standardowy PCR wymaga użycia od 10 do 50 pmol startera na reakcję. Rozcieńczenie oligonukleotydów buforem TE lub wodą do końcowej koncentracji 100 μM daje 100 pmol oligonukleotydu na 1μl;
- najbardziej precyzyjnym sposobem oceny koncentracji oligonukleotydów jest pomiar gęstości optycznej przy długości fali 260nm;
- nie zaleca się stosowania koncentracji poniżej 10pmol/ µl, gdyż oligonulkeotydy mogą być niestabilne;
- należy unikać zbyt częstego zamrażania/rozmrażania oligonukleotydów;
- znakowane fluorescencyjnie oligonukleotydy powinny być przechowywane w ciemności.
