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Os oligonucleótidos são enviados em forma seca (liofilizado) e são muito fáceis de ressuspender numa solução aquosa. Portanto, só deve ser dissolvido imediatamente antes da utilização. Os oligonucleótidos modificados também são dissolvidos em água estéril, pH 7,0 ou em um dos buffers nomeados.
Ter em conta as seguintes instruções:
- É muito importante centrifugar (shor-spin) o conteúdo antes de abrir o tubo pela primeira vez. o pellet seco pode ser perdido se não estiver na parte inferior do tubo.
- Os oligonucleótidos são melhor armazenados em estado seco. Eles são notavelmente estáveis, mesmo quando armazenado a 4 ° C ou à temperatura ambiente. Para armazenamentos de maior duração, os oligonucleótidos secos devem ser armazenados a - 20 ° C.
- Recomendamos dissolver os oligonucleótidos em água estéril a pH neutro (pH 7,0). Normalmente a água de sistemas de purificação de água têm um pH ácido, neste caso, um buffer é recomendado, que mantém o pH constante em uma escala ligeiramente básica. Recomendamos o uso de TE (10 mM Tris pH 8.0; 0,1 mM EDTA, pH 8,0) * ou água esterilizada para ressuspender os oligonucleótidos secos.
- O uso de água com pH inferior a 7,0 leva a depurinação do oligonucleótido. Use NaOH para aumentar o pH ou dissolver o oligonucleótido em um buffer apropriado.
- Condições de trabalho e tratamento adequados num ambiente livre de nuclease garante uma vida longa para o RNA e DNA. Este deverá ser o preferido até ao tratamento DEPC. O maior perigo para oligonucleótidos dissolvidos encontra-se nas nucleases. Para minimizar a degradação por nucleases, deverá armazenar seus oligos a - 20 ° C.
- Oligonucleótidos modificados com Cy5 são instáveis em meio alcalino. Verificar se o solvente realmente tem um pH de 7,0.
- Há benefÃcios de criar aliquotas de oligonucleótidos em porções para uso imediato e aqueles para o armazenamento de longo prazo.
- Adicionando TE ou água em dez vezes o número de nanomoles dará uma concentração 100μM final. Esta concentração fornece 100 picomoles de oligonucleótido por µL. A maioria das reações PCR usará 10-50 picomoles de cada primer por reação.
- Os meios mais precisos de avaliar o montante de oligonucleótidos seguidamente à sÃntese é medir a densidade óptica do produto final em 260nm. Este valor é fornecido na folha de especificações e é determinada apenas após purificação, uma vez que nucleótidos não incorporados e grupos de protecção podem levar a estimativas imprecisas da massa do oligonucleótido.
- Concentrações de trabalho de 10 pmol / mL ou menores são mais instáveis. Diluir apenas quantidades mÃnimas e utilizar apenas uma ou duas vezes.
- Frequente congelamento / descongelamento deve ser evitado.
- Oligos marcados com fluorescência deverão ser armazenados no escuro.
